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登革熱抗原NS1早期檢測試劑

Panbio Dengue Early ELISA

產(chǎn)品目錄號 01PE40

預期用途

Panbio Dengue EARLY ELISA 是一種登革熱NS1 抗原捕獲 ELISA。 用于定性檢測血清中的 NS1 抗原， 輔助臨床實驗室診斷出現(xiàn)登革熱臨床癥狀的患者。 Panbio Dengue EARLY ELISA 應該與其它登革熱血清診斷法聯(lián)用。

概述

登革熱病毒是黃病毒屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風險的地區(qū)，登革熱是導致人類發(fā)病和死亡嚴峻的蟲媒病毒疾病 ¹。登革熱病毒有 4 種不同但抗原相關(guān)的血清型，通過蚊（主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊）傳播。

登革熱病毒感染的臨床表現(xiàn)各不相同，從亞臨床表現(xiàn)到致命。依據(jù)嚴重程度，該疾病被分為以下等級：非特異性發(fā)熱疾病，典型登革熱，登革出血熱（DHF）（1 級和 2 級），和登革休克綜合征（DSS）（3 級和 4 級）¹。典型登革熱的特征是突然發(fā)熱并至少伴隨以下 2 種癥狀：頭痛、眼眶后疼痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛、皮疹、出血表現(xiàn)或白血球減少癥 ²。雙相發(fā)熱病程常見失眠和厭食，失去味覺或口苦。DHF 和 DSS 是嚴重的潛在致命性并發(fā)癥，通常與感染第二種血清型有關(guān) ³。

登革熱的早期診斷允許進行早期的支持療法和監(jiān)控。這降低了 DHF 或DDS 等并發(fā)癥發(fā)生的風險，尤其是在登革熱流行的國家 ⁴。

通過ELISA 檢測登革熱NS1 抗原是一種非常重要的方法，因為它能夠在血清轉(zhuǎn)化之前進行感染檢測。 從發(fā)病后的第 1 天直到第 9 天都能在血清中檢測到NS1 抗原 ^5,6,7（見圖示）。這區(qū)別于 IgM 抗體，因為 IgM 抗體直到發(fā)病后 3-5 天后才檢測得到。繼發(fā)性登革熱病毒感染的特征是高 IgG ， 水平且其峰值檢測窗口是在發(fā)病后的 6-15 天。這可能伴隨著 IgM 水平升高 ^10,11。Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于檢測登革熱感染的 IgG 抗體水平相對于閾值特異性升高。該試驗不用于檢測既往感染引起的低水平 IgG 抗體，這種情況通常見于地方性流行區(qū)的較多人群。為了為準確地從發(fā)病后的不同階段診斷登革熱患者，應該使用Panbio Dengue EARLY ELISA (01PE40)，Panbio Dengue lgM Capture ELISA (01PE20) 和 Panbio Dengue lgG Capture ELISA (01PE10)三者相結(jié)合的方法。

檢測原理

血清中存在的登革熱 NS1 抗原，與微孔板上聚苯乙烯表面附著的抗 NS1 抗體相結(jié)合。洗去剩余的血清并添加 HRP 標記的抗 NS1 單克隆抗體。在培養(yǎng)完成后清洗微孔，再添加無色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/ *（TMB 顯色液）。底物被酶水解后，TMB 顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB 變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱NS1 抗原。

提供的材料

• 抗 NS1 抗體包被微孔板（12x8 孔）- 微孔板由抗 NS1 抗體包被。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• HRP 標記抗 NS1 單克隆抗體– 1 瓶，15mL（橙色）。 辣根過氧化物酶（HRP）標記抗 NS1 單克隆抗體，含防腐劑（0.1% Proclin™）。即用型。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 清洗緩沖液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20 和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶，可在 37℃孵育液體至澄清?；旌暇鶆颉Ｓ?19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲存一周。
• 樣本稀釋劑– 1 瓶，22mL（棕色）。即用型。Tris 緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• TMB 顯色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和*的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 陽性質(zhì)控品– 1 瓶，紫色瓶蓋，1.2mL 重組抗原（含 0.1%Proclin™和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 校準品– 2 瓶，橙色瓶蓋，1.5mL 重組抗原（含 0.1%Proclin™和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

8. 陰性質(zhì)控品– 1 瓶，白色瓶蓋，1.2mL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

• 終止液 – 1 瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內(nèi)儲存于 2-25℃可保持穩(wěn)定。

Proclin™ 300 是 Rohm 和 Haas 公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

1. 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000μL 容積）

2. 去離子水

3. 標板清洗系統(tǒng)

4. 酶標儀，含 450nm 濾波器

5. 計時器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 用于稀釋的試管或微滴定板

注意事項

用于體外診斷

• 在制備質(zhì)控品的過程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過人類免疫缺陷病毒 1 和 2（HIV 1 和 2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結(jié)果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級 ¹² 處理。
• 該測試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質(zhì)的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長的血清。

4. 不可加熱，否則血清將失去活性。

5. 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫

（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導致污染。

7. 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯誤結(jié)果。

8. 底物系統(tǒng)：

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長時間陽光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。

TMB 可能呈現(xiàn)淡藍色，這不影響底物的活性或測定結(jié)果。

9. 某些試劑盒組成包含疊氮話鈉，疊氮話鈉可能與鉛或銅管反應形成極易爆炸的金屬疊氮話合物。通過管道裝置處理這些試劑時，請用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內(nèi)累積。

10. 疊氮話鈉還抑制酶標物的活性。在添加酶標物時必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

登革熱抗原NS1早期檢測試劑